Главный отрицательный персонаж в этой пьесе — это Полиграф Полиграфович Шариков. Это человекоподобное воплощение зла получилось в результате операции, когда профессор Преображенский пересадил бездомному псу Шарику гипофиз Клима Чугункина. Клим Чугункин вел непристойный и разгульный образ жизни, он был вором, задирой, любил выпить. Пёс Шарик после операции стал принимать его внешние черты и его характер. Он превратился в человека с низменными интересами и поступками. Стал материться, требовать себе жилплощадь, портил имущество. С каждым днем он становился всё наглее, превращаясь в настоящее чудовище. Он даже вступил в отряд по борьбе с бездомными животными, забыв о том, что сам он был беспородным псом, нуждающимся в ночлеге и пропитании. В Шарикове проявляются самые гнусные человеческие черты, он способен на предательство, на обман и коварство ради своих интересов.
В повести есть еще один отрицательный герой — это председатель домкома Швондер. Он ненавидит профессора Преображенского, но его ненависть рождается из-за его низкого характера и слабости. Ему далеко до Профессора, солидного, воспитанного, умного. Швондер преклоняется перед революционной властью, а не перед искусством, образованием и культурой. Именно поэтому ему становится интересен Шариков, которого можно «натравливать» на Преображенского. Швондер — человек с мелкой душой, который учит Шарикова писать доносы и рассказывает ему о его правах. Главная цель Швондера — навредить профессору Преображенскому.
Сам профессор Преображенский – неоднозначный персонаж. С одной стороны, он — исследователь, делающий новые научные открытия, с другой стороны он — вершитель человеческих судеб. Такое чувство, что он возомнил себя Богом и легко решает, кому жить, кому умереть. Но его эксперимент с собакой заставляет его понять, что он не Бог и напрасно решил вмешаться в законы природы. Преображенский. Сама фамилия говорит о том, что он должен преображать этот мир, делать его лучше. Сотворенный же им Шариков оказался мерзким человеком, не поддающимся воспитанию. Лучше бы он оставался милым и добрым псом Шариком. Шарик был умным псом и быстро всему учился. Это говорит о том, что природа животных часто бывает чище и лучше человеческой. Преображенский — культурный и воспитанный человек, он ценит в людях интеллект и воспитание, считая, что если все люди будут культурными, в государстве прекратится разруха.
Доктор Борменталь — преданный ученик профессора Преображенского. Он благодарен Преображенскому за то, что тот зачислил его на кафедру и позвал в дальнейшем к себе ассистентом. Борменталь обладает положительными чертами: он благородный, воспитанный, культурный. Он стремится сделать более воспитанным и Шарикова, но понимает, что это бесполезно. Борменталь оказывается более решительным, чем Преображенский, ведь в ту минуту, когда Шариков схватился за револьвер, именно Борменталь проявляет твердость характера, решаясь расправиться с Шариковым.
Борменталь и Преображенский — положительные герои, обладающие совестью, сообразительностью, умом. Положительными персонажами можно назвать и помощниц по хозяйству, живущих в доме профессора. Это Зина и Дарья Петровна. Они отличаются преданностью Преображенскому, добрым сердцем и благородством. Зина и Дарья Петровна всегда находятся на стороне профессора, выполняют его поручения, не предают и не выдают его.
Таким образом, положительных героев в повести всё-таки больше: рядом с профессором Преображенским находятся преданные ему люди, которые готовы помогать ему преображать мир к лучшему.